Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次造注意到呼吸道自身抗原到造注意到1DF乳癌针灸病征的实质性率在幼儿时期就有较好的阐述，多个呼吸道自身抗原白血病的幼儿之前有70%在血清转换后10在短期内患上乳癌，而随访15年的幼儿这一比率减低到84%。相较之下，占针灸1DF乳癌一半以上的DF1DF乳癌的病症机制还没有给予充分的数据深入研究。

越发多的人开始采用分期管理系统来定义1DF乳癌的实质性：个躯在造注意到多种呼吸道自身抗原时进入第1前期，造注意到血糖异常时进入第2前期，造注意到病征时进入第3前期。一些多发呼吸道自身抗原白血病的个躯，在1期和2期，实质性较较慢，并发展为病症的1DF乳癌。我们先前阐述了一四组在首次监测到多种呼吸道自身抗原取样后将近10年无乳癌的较较慢实质性者，这四组病患人数再加，但特点非常清楚。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T细胞膜底物在实质性快速的病患之前基本不发挥作用，但在早先病症和长期发挥作用的乳癌病患之前很容易监测到。这有可能表明，与实质性病患相较，这些病患免疫性底物的调节增强。

以前数据深入研究表明，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常人，但乳癌病患发挥作用一些基本功能缺陷，其之前以外对IL-2的底物能力降低。此外，乳癌病患之前的不稳定性CD4+T细胞膜有可能对调节更具抵抗性，表现为不稳定性T细胞膜的消除向西移动，纯净造成了的Treg和躯内造成了的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞膜之前IL-2底物向西移动。本数据深入研究的目的是阐述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极快速实质性者之前的特点，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX数据深入研究是一项以成年人为基础的垂直数据深入研究，在21岁表列出确诊的病患亲属之前检验1DF乳癌的有有可能因素。我们先前阐述了长期快速实质性者的特点，他们维持多重呼吸道自身抗原白血病超过10年，但没有造注意到乳癌的针灸病征，较慢性或非展开性免疫性。随后，10名之前维持无乳癌并愿意提供大量血液取样的快速实质性者扩展到T和B细胞膜基本功能深入研究。在目前为止的数据深入研究之前，8名较慢实质性者(SP四组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的呼吸道自身抗原白血病。所有的发起者都东南面1DF乳癌实质性的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗原对某些抗原的白血病底物，然而，一名病患并未东南面2期将近6年，但没有造注意到针灸病征，一名病患被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集科学实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究之前对该NADPH展开了单独审计。裂解外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多常量流式细胞膜忍术和T细胞膜消除试验审计NADPH之前Treg的振幅、表DF和基本功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)展开无委派聚类深入研究，审计Treg表DF。

结果：与身体健康NADPH相较，来自较慢实质性躯的思绪CD4+T细胞膜的委派聚类标示出，酪氨酸的思绪CD4+ Treg振幅减低，与抑制作用诱导的TNFR相关亚基(GITR)表达出来减低有关。一名HbA1c升高的病患与实质性快速者和意味着的对照四组相较，Treg曲谱相同。基本功能深入研究表明，与身体健康NADPH相较，来自快速实质性躯的Treg依赖性的CD4+不稳定性T细胞膜消除明显受损。表现为对不稳定性CD4+T细胞膜CD25和CD134表达出来的消除减低。

上图1 集中的表DF深入研究标示出，CD4+Treg亚DF在较慢实质性链表之前减低。由FlowSOM生成的Treg寝室，挤满在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物表达出来确认造出10个元簇:思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在链表四组外围上色。每个链表之前的糕上图声称单个记号的表达出来级别。(b)每个元聚类的热上图，以标示出整躯记号表达出来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成上图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster箱孙子中央线上图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞膜(l)。浅蓝色格孙子均是由理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模DF证实，Treg振幅的减低是实质性快速的记号。基准离孙子通道(a - f)和柑橘深入研究(g-k)较为SP发起者和意味着的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的不同。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的均是由性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来展开裂解，精心设计FlowSOM群躯。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)四组以及NADPHSP 606(浅蓝色)之前CD25+ cd127的振幅汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离孙子通道孙子集的箱孙子中央线上图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来低压着色，箭头突造出的簇被定位为SP和HD链表间的不同。(j)箱孙子中央线上图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组之前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较丰度(比率)。(k)直方上图标示出每个簇的表DF(黄色)和Treg记号相较表达出来与取材表达出来(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一路上，CPUTreg_4。取材与所有其他簇之前记号的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

上图3 与身体健康献血者相较，实质性快速者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T细胞膜元簇(思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达出来热上图(sp606不以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之前所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达出来串联，标示出直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH以外，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和意味着的HD不以外在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表达出来，从基准离孙子通道，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，标示出直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

上图4 来自快速实质性的CD4+ treg细胞膜控制不稳定性CD4+T细胞膜的能力降低。SP四组用蓝色的中央线和格孙子声称，HD四组用黑色的中央线和格孙子声称，浅蓝色的中央线/格孙子声称NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被记号为CFSE, Treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠激光阴细胞膜，培植3天后展开流式细胞膜忍术监测。(a-d)与CD4+接收者者相较可不的treg培植(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。采用白血病对照(酪氨酸的拥护细胞膜不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

上图5 不稳定性CD4+T细胞膜对快速实质性的T细胞膜激光阴的消除更尖锐。SP四组用蓝色的中央线和格孙子声称，HD四组用黑色的中央线和格孙子声称，浅蓝色的中央线/格孙子声称NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel记号，treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠激光阴细胞膜，培植3天后展开流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因孙子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者合作培植。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论断：我们得造出的论断是，来自快速实质性孙子的激光阴思绪CD4+Treg在GITR表达出来之前给予了扩展和丰富，强调了进一步数据深入研究Treg在1DF乳癌有可能会个躯之前的举例来说的必要性。

原文造注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28