Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程之前逐渐扩展

从第一次显现成肾脏自身特异性到显现成1HG乳癌临床研究病征的重大突破率在成年人时期就有极佳的阐述，多个肾脏自身特异性无病征的成年人之前有70%在血清转换后10将近患上乳癌，而随访15年的成年人这一%-增加到84%。远比，占临床研究1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的复发必要还未得到必要的研究。

越来越多的人开始运用于分期系统来表述1HG乳癌的重大突破：个锥体在显现成多种肾脏自身特异性时转入第1过渡期，显现成血糖异常时转入第2过渡期，显现成病征时转入第3过渡期。一些多发肾脏自身特异性无病征的个锥体，在1期和2期，重大突破较迟，并发展为复发的1HG乳癌。我们先前阐述了一一组在首次检查到多种肾脏自身特异性试样后非常少10年无乳癌的以致于迟重大突破者，这一组患儿数量少，但特性非常明确。随后，我们辨认出肾脏自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞加成在重大突破平稳的患儿之前基本不共存，但在近期复发和经常性共存的乳癌患儿之前很容易检查到。这意味著说明，与重大突破患儿相较来说，这些患儿自身免疫加成的缓冲增强。

早期研究说明，尽管缓冲性T巨噬细胞(Treg)数量情况下，但乳癌患儿共存一些功用缺陷，其之前包括对IL-2的加成技能降低。此外，乳癌患儿之前的震荡CD4+T巨噬细胞意味著对缓冲突显抵抗性，表现为震荡T巨噬细胞的诱导弱化，自然现象产生的Treg和锥肾脏产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞之前IL-2加成弱化。本研究的意在是阐述了CD4+缓冲性T巨噬细胞(Treg)在这群人以致于平稳重大突破者之前的特性，他们的总数量为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群结合的纵向研究，在21岁以下确诊的患儿亲属之前核对1HG乳癌的危险因素。我们先前阐述了经常性平稳重大突破者的特性，他们保持多重肾脏自身特异性无病征超过10年，但未显现成乳癌的临床研究病征，迟性或非来进行性自身免疫。随后，10名独自保持无乳癌并希望提供大量尿液试样的平稳重大突破者扩及T和B巨噬细胞功用统计分析。在迄今为止的研究之前，8名迟重大突破者(SP一组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肾脏自身特异性无病征。所有的参与者都所处1HG乳癌重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身特异性对某些抗原的无病征加成，然而，一名患儿已经所处2期非常少6年，但未显现成临床研究病征，一名患儿被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集试制之前试样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该NADPH来进行了单独评估。受控外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞精和T巨噬细胞诱导试制评估NADPH之前Treg的Hz、特异性和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、并不一定和回归)来进行无统筹聚类统计分析，评估Treg特异性。

结果：与有益NADPH相较来说，来自迟重大突破锥体的清醒CD4+T巨噬细胞的统筹聚类说明了，诱导的清醒CD4+ TregHz增加，与止痛药诱导的TNFR无关抗原(GITR)传达增加有关。一名HbA1c升温的患儿与重大突破平稳者和最简单的对照一组相较来说，Treg明人有所并不相同。功用统计分析说明，与有益NADPH相较来说，来自平稳重大突破锥体的Treg介导的CD4+震荡T巨噬细胞诱导明显毁损。表现为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的诱导增加。

示意图1 深入的特异性统计分析说明了，CD4+Treg亚HG在迟重大突破队列之前增加。由FlowSOM分解的Treg室，围住在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物传达断定成10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点一组周围上色。每个节点之前的饼示意图对此单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了整锥体上面传达。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)分解示意图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的表层。(e-l)相较原子量为每个metacluster筒该线示意图(原子量> 0.05%)考虑到为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。黄色红色代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模HG推测，TregHz的增加是重大突破平稳的标识。标准门控(a - f)和玉米统计分析(g-k)相较来说较SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达来进行受控，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(白点)和SP(蓝点)一组以及NADPHSP 606(黄色)之前CD25+ cd127的Hz摘要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的筒该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度后处理，箭头突成的簇被识别系统为SP和HD队列两者之间的并不相同。(j)筒该线示意图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组之前，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较原子量(%-)。(k)直方示意图说明了每个簇的特异性(黑色)和Treg上面相较传达与或多或少传达(深蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。或多或少与所有其他簇之前上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与有益献血者相较来说，重大突破平稳者清醒treg的GITR增加。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方示意图(c)和摘要示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NADPH包括，p< 0.05(深蓝色)NADPHSP 606和最简单的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR传达，从标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)串联，说明了直方示意图(e)和摘要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自平稳重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制震荡CD4+T巨噬细胞的技能降低。SP一组用深蓝色的该线和红色对此，HD一组用灰色的该线和红色对此，黄色的该线/红色对此NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(应答者)被上面为CFSE, Treg按观察的%-溶液。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养成来3天内来进行流式巨噬细胞精检查。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg培养成来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养成来。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。运用于无病征对照(诱导的作出反应巨噬细胞不含treg)推算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较来说较测试

示意图5 震荡CD4+T巨噬细胞对平稳重大突破的T巨噬细胞重置的诱导更敏感。SP一组用深蓝色的该线和红色对此，HD一组用灰色的该线和红色对此，黄色的该线/红色对此NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上面，treg按观察的%-溶液。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养成来3天内来进行流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬生长因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养成来。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱导调升(b)。(c,d) CD25诱导调升(c)和CD134诱导调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养成来之前的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较来说较测试

论断：我们得成的论断是，来自平稳重大突破子的重置清醒CD4+Treg在GITR传达之前得到了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1HG乳癌几率个锥体之前的异质性的必要性。

原意成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28