Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成果缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞自身血清到注意到1DF癌症流行病学呕吐的成果所部在成人时期就有极佳的揭示，多个肝细胞自身血清HIV的成人中的曾70%在血清叠加后10将近患上癌症，而随访15年的成人这一分之一增大到84%。相比之下之下，占流行病学1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的患病机制还很难给与充分的科学研究。

越来越多的人开始可用再行系统来表述1DF癌症的成果：个本体在注意到多种肝细胞自身血清时转到第1期中的，注意到血糖出现异常时转到第2期中的，注意到呕吐时转到第3期中的。一些多发肝细胞自身血清HIV的个本体，在1期和2期，成果较迟，并工业发展为患病的1DF癌症。我们之前揭示了一四组在首次验证到多种肝细胞自身血清试样后仅仅10年无癌症的极迟成果者，这四组病变人数少，但特性更为明确。随后，我们挖掘出肝细胞自身抗本体特异性CD8+T细胞核反应在成果减迟的病变中的也就是说不实际上，但在近期患病和长期实际上的癌症病变中的很更易验证到。这可能会说明，与成果病变相比之下，这些病变免疫性反应的调节强化。

早期科学研究说明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但癌症病变实际上一些动态缺陷，其中的有数对IL-2的反应并能增高。此外，癌症病变中的的震荡CD4+T细胞核可能会对调节更具抵抗性，表现为震荡T细胞核的抑止减迟，自然产生的Treg和排泄产生的诱导Treg，以及抗本体亲身经历的CD4+T细胞核中的IL-2反应减迟。本科学研究的目的是揭示了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群极减迟成果者中的的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

步骤：BOX科学研究是一项以人群系统化的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病变亲属中的检查1DF癌症的凶险因素。我们之前揭示了长期减迟成果者的特性，他们保持多重肝细胞自身血清HIV超过10年，但很难注意到癌症的流行病学呕吐，迟性或非完成性免疫性。随后，10名继续保持无癌症并希望共享大量血液试样的减迟成果者纳入T和B细胞核动态数据分析。在目前的科学研究中的，8名迟成果者(SP四组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身血清HIV。所有的发起者都属于1DF癌症成果的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身血清对某些抗本体的HIV反应，然而，一名病变已经属于2期仅仅6年，但很难注意到流行病学呕吐，一名病变被治疗为癌症，该受试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中的对该小分子完成了单独数据分析报告。裂解外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核心法和T细胞核抑止试验数据分析报告小分子中的Treg的频带、表现DF和动态。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)完成无行政官员聚类数据分析，数据分析报告Treg表现DF。

结果：与生已逝品质小分子相比之下，来自迟成果本体的失忆CD4+T细胞核的行政官员聚类辨识，抑止的失忆CD4+ Treg频带增大，与止痛药诱导的TNFR特别蛋白(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c消退的病变与成果减迟者和比如说的对照四组相比之下，Treg可知有所并不相同。动态数据最近，与生已逝品质小分子相比之下，来自减迟成果本体的Treg介导的CD4+震荡T细胞核抑止明显损伤。表现为对震荡CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的抑止增大。

平面图1 熟悉的表现DF数据分析辨识，CD4+Treg亚DF在迟成果配置文件中的增大。由FlowSOM转化的Treg室，汇聚在来自所有小分子的已逝CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物隐含断定出10个元簇:失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个并不相同Treg标上转化的10个元簇的MST。每个路由代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，很大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由四组周围上色。每个路由中的的糕点平面图指出单个标上的隐含级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识总本体标上隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下之下丰度为每个metacluster箱内本站平面图(丰度> 0.05%)确认为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞核(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞核(l)。紫色带叔父代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测模DF推测，Treg频带的增大是成果减迟的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)较为SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含完成裂解，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)四组以及小分子SP 606(紫色)中的CD25+ cd127的频带综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的箱内本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含气压着色，标记突出的簇被辨认为SP和HD配置文件之间的并不相同。(j)箱内本站平面图辨识了在SP(斑点)和HD(灰点)四组中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比之下之下丰度(分之一)。(k)直方平面图辨识每个簇的表现DF(粉红色)和Treg标上相比之下之下隐含与文化背景隐含(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。文化背景与所有其他簇中的标上的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

平面图3 与生已逝品质献血者相比之下，成果减迟者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞核元簇(失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个隐含标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的隐含热平面图(sp606不有数在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串联，辨识直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有小分子有数，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和比如说的HD不有数在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)串联，辨识直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

平面图4 来自减迟成果的CD4+ treg细胞核操控震荡CD4+T细胞核的并能增高。SP四组用蓝色的本站和带叔父指出，HD四组用红色的本站和带叔父指出，紫色的本站/带叔父指出小分子sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按掩蔽的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培养出来3天后完成流式细胞核心法验证。(a-d)与CD4+转发者相比之下之下应的treg培养出来(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百份。可用HIV对照(抑止的响应细胞核不含treg)近似值抑止百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

平面图5 震荡CD4+T细胞核对减迟成果的T细胞核还原的抑止更敏感。SP四组用蓝色的本站和带叔父指出，HD四组用红色的本站和带叔父指出，紫色的本站/带叔父指出小分子sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按掩蔽的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培养出来3天后完成流式细胞核心法(CD25反染)和细胞核因叔父数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

假设：我们得出的假设是，来自减迟成果叔父的还原失忆CD4+Treg在GITR隐含中的给与了构建和丰富，强调了有利于科学研究Treg在1DF癌症风险个本体中的的关联性的必要性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28