Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病变进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身HIV到经常出现1DF高血压病理腹泻的成效所部在儿童初期就有日渐好的描述，多个肝细胞自身HIVHIV的儿童中都有70%在血清匹配后10年末复发高血压，而随访15年的儿童这一数目降低到84%。相对之下，占病理1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的中风选择性还很难受益充分的研究课题。

日渐多的人开始常用分期系统来定义1DF高血压的成效：个质在经常出现多种肝细胞自身HIV时转入第1收尾，经常出现血糖持续性时转入第2收尾，经常出现腹泻时转入第3收尾。一些多发肝细胞自身HIVHIV的个质，在1期和2期，成效快速，并工业发展为中风的1DF高血压。我们前描述了一两组在首次检查到多种肝细胞自身HIV取样后大概10年无高血压的快得多成效者，这两组病变人数不及，但不同之处非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗质甲基化CD8+T巨噬细胞催化在成效很慢的病变中都理论上不假定，但在近期中风和依然假定的高血压病变中都很容易检查到。这可能表明，与成效病变相对，这些病变自身免疫催化的平衡增强。

早期研究课题表明，尽管平衡性T巨噬细胞(Treg)总数正常人，但高血压病变假定一些机能原因，其中都包括对IL-2的催化能够减低。此外，高血压病变中都的畸变CD4+T巨噬细胞可能对平衡凸显抵抗性，体现为畸变T巨噬细胞的可抑制减弱，自然转化成的Treg和质外转化成的抑止Treg，以及抗质经历的CD4+T巨噬细胞中都IL-2催化减弱。本研究课题的用以是描述了CD4+平衡性T巨噬细胞(Treg)在一小群极很慢成效者中都的不同之处，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

系统性方法：BOX研究课题是一项以成年人为基础的横向研究课题，在21岁以下确诊的病变亲属中都核对1DF高血压的凶险因素。我们前描述了依然很慢成效者的不同之处，他们保持多重肝细胞自身HIVHIV高达10年，但很难经常出现高血压的病理腹泻，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量血液取样的很慢成效者纳入T和B巨噬细胞机能系统性。在目前的研究课题中都，8名慢成效者(SP两组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞自身HIVHIV。所有的大多数人都位处1DF高血压成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身HIV对某些抗质的HIV催化，然而，一名病变仍未位处2期大概6年，但很难经常出现病理腹泻，一名病变被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集科学实验取样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中都对该供质透过了直接不确定性评估。复合外周血单个连锁催化巨噬细胞(PBMCs)，有别于多参数流式巨噬细胞绝技和T巨噬细胞可抑制试验不确定性评估供质中都Treg的kHz、表DF和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、相关联和复出)透过无委派聚类系统性，不确定性评估Treg表DF。

结果：与健康供质相对，来自慢成效质的无意识CD4+T巨噬细胞的委派聚类推断，激活的无意识CD4+ TregkHz降低，与低剂量抑止的TNFR相关蛋白(GITR)声称降低有关。一名HbA1c下降时的病变与成效很慢者和匹配的取样相对，Treg磬略有不同。机能推断，与健康供质相对，来自很慢成效质的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞可抑制明显损伤。体现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134声称的可抑制降低。

示意图1 深入的表DF系统性推断，CD4+Treg亚DF在慢成效队列中都降低。由FlowSOM分解成的Treg会议室，涌进在来自所有供质的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物声称认定出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)常用9个不同Treg标识分解成的10个元簇的MST。每个端口亦然一个集群(100个集群)，日渐大的元集群(10个元集群)在端口两组外面绘图。每个端口中都的饼示意图声称单个标识的声称层级。(b)每个元聚类的热示意图，以推断总质标识声称。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说总质量为每个metacluster箱新线示意图(总质量> 0.05%)相符为HD和SP两组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。浅蓝色白点亦然理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩验证。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模DF证实，TregkHz的降低是成效很慢的标志。基准相关联(a - f)和玉米系统性(g-k)来得SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的亦然性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR声称透过复合，模拟器FlowSOM群质。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)两组以及供质SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的kHz核心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联弟集的箱新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3声称强度着色，斜新线突出的簇被识别为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)箱新线示意图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对来说总质量(数目)。(k)直方示意图推断每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识相对来说声称与历史背景声称(白色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。历史背景与所有其他簇中都标识的声称有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩验证

示意图3 与健康献血者相对，成效很慢者无意识treg的GITR降低。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个声称标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的声称热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR声称串联，推断直方示意图(c)和核心内容示意图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和验证，p< 0.07(浅蓝色)所有供质包括，p< 0.05(白色)供质SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR声称，从基准相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)串联，推断直方示意图(e)和核心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩验证

示意图4 来自很慢成效的CD4+ treg巨噬细胞遏制畸变CD4+T巨噬细胞的能够减低。SP两组用白色的新线和白点声称，HD两组用灰色的新线和白点声称，浅蓝色的新线/白点声称供质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标识为CFSE, Treg按观察的数目反应物。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，培训3翌日透过流式巨噬细胞绝技检查。(a-d)与CD4+反之亦然者相对来说应的treg培训(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。常用HIV对照(激活的响应巨噬细胞不含treg)测算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

示意图5 畸变CD4+T巨噬细胞对很慢成效的T巨噬细胞转化的可抑制日渐敏感。SP两组用白色的新线和白点声称，HD两组用灰色的新线和白点声称，浅蓝色的新线/白点声称供质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标识，treg按观察的数目反应物。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，培训3翌日透过流式巨噬细胞绝技(CD25反染)和巨噬细胞因弟系统性。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分所部(b)。(c,d) CD25可抑制百分所部(c)和CD134可抑制百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中都的声称。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

事实：我们给出的事实是，来自很慢成效弟的转化无意识CD4+Treg在GITR声称中都受益了引入和丰富，强调了实质性研究课题Treg在1DF高血压不确定性个质中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28