Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次成现去甲自身特异性到成现1M-冠心病针灸副作用的成效率在幼儿后期就有不太好的描绘出，多个去甲自身特异性阳性的幼儿当中有70%在血清转换后10年内入院冠心病，而随访15年的幼儿这一比重减低到84%。相对于之下，占针灸1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的发病机制还没有人赢取更好的研究成果。

日渐多的人开始用作已确定的系统来定义1M-冠心病的成效：群纤在成现多种去甲自身特异性时进入第1阶段，成现血糖异常时进入第2阶段，成现副作用时进入第3阶段。一些多发去甲自身特异性阳性的群纤，在1期和2期，成效较太快，并发展为发病的1M-冠心病。我们之前描绘出了一小组在首次验证到多种去甲自身特异性检验后至少10年无冠心病的极太快成效者，这小组副作用人数少，但多种不同之处非常明确。随后，我们找到去甲自身特异性特异性CD8+T肽质质子化该在成效减太快的副作用当中基本不存在，但在近期发病和或多或少的冠心病副作用当中很容易验证到。这显然表明，与成效副作用相对于，这些副作用自身免疫质子化该的适度增强。

早期研究成果表明，尽管适度性T肽质(Treg)数量也就是说，但冠心病副作用存在一些功用缺陷，其当中还包括对IL-2的质子化该能力也降低。此外，冠心病副作用当中的畸变CD4+T肽质显然对适度不具抵抗性，展示出为畸变T肽质的抑制作用逼近，自然诱发的Treg和纤外诱发的抑制Treg，以及特异性经历的CD4+T肽质当中IL-2质子化该逼近。本研究成果的最终目标是描绘出了CD4+适度性T肽质(Treg)在群集极减太快成效者当中的多种不同之处，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群辅以的纵向研究成果，在21岁此表确诊的副作用亲属当中检查1M-冠心病的危险因素。我们之前描绘出了近十年减太快成效者的多种不同之处，他们保持多重去甲自身特异性阳性超过10年，但没有人成现冠心病的针灸副作用，太快性或非同步外阴自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并不愿还包括大量血液检验的减太快成效者纳入T和B肽质功用归纳。在目前的研究成果当中，8名太快成效者(SP小组)，当中位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的去甲自身特异性阳性。所有的参与者都处于1M-冠心病成效的1期，尽管一些人随后无法控制了去甲自身特异性对某些特异性的阳性质子化该，然而，一名副作用已经处于2期至少6年，但没有人成现针灸副作用，一名副作用被诊断为冠心病，该受试者72岁，在收集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该丝氨酸同步进行了原则上评量。分离外周血单个氢肽质(PBMCs)，改用多参数流式肽质奥义和T肽质抑制作用试验评量丝氨酸当中Treg的频谱、特异性和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、密切就其和重回)同步进行无指导聚类归纳，评量Treg特异性。

结果：与健康丝氨酸相对于，来自太快成效纤的知觉CD4+T肽质的指导聚类推测，抑制的知觉CD4+ Treg频谱减低，与糖皮质激素抑制的TNFR就其肽(GITR)表达成来减低有关。一名HbA1c升高的副作用与成效减太快者和归一化的对照小组相对于，Treg谱有所多种不同。功用归纳表明，与健康丝氨酸相对于，来自减太快成效纤的Treg介导的CD4+畸变T肽质抑制作用相对于毁损。展示出为对畸变CD4+T肽质CD25和CD134表达成来的抑制作用减低。

布1 的系统地的特异性归纳推测，CD4+Treg亚M-在太快成效表头当中减低。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的能活CD4+CD45RA -肽质上。根据标有物表达成来鉴定成10个元簇:知觉T肽质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肽质;HLA-DR + GITR +知觉T肽质;文件的系统Treg_1;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;和文件的系统Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个路由器代表人一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由器小组周围上色。每个路由器当中的糕点布暗示单个标有的表达成来级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整纤标有表达成来。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)作用于布，以及FlowSOM标记的每个元簇的沙质。(e-l)相对总质量为每个metacluster装新线布(总质量> 0.05%)确定为HD和SP小组:文件的系统Treg_2 (e),文件的系统Treg_3 (f),文件的系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肽质(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肽质(l)。绿色白点代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩验证。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用作CITRUS的预测模M-表明，Treg频谱的减低是成效减太快的字样。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP参与者和归一化的HD参与者在CD4+CD45RA−T肽质上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表人性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表达成来同步进行分离，精心设计FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)小组以及丝氨酸SP 606(绿色)当中CD25+ cd127的频谱概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的装新线布;(c) HLA-DRloGITR−(文件的系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件的系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件的系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件的系统T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达成来切变着色，箭头突成的簇被标记为SP和HD表头二者之间的多种不同。(j)装新线布推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)小组当中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对总质量(比重)。(k)直方布推测每个簇的特异性(红色)和Treg标有相对表达成来与背景表达成来(金色);上列，文件的系统Treg_3;下面一行，文件的系统Treg_4。背景与所有其他簇当中标有的表达成来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩验证

布3 与健康献血者相对于，成效减太快者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T肽质元簇(知觉T肽质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肽质;HLA-DR + GITR +知觉T肽质;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达成来标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达成来热布(sp606不还包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表达成来串联，推测直方布(c)和概述布(d)。Wilcoxon筛选符号秩和验证，p< 0.07(绿色)所有丝氨酸还包括，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和归一化的HD不还包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达成来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)串联，推测直方布(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩验证

布4 来自减太快成效的CD4+ treg肽质控制畸变CD4+T肽质的能力也降低。SP小组用金色的新线和白点暗示，HD小组用金色的新线和白点暗示，绿色的新线/白点暗示丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肽质同步进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被标有为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再造肽质，培育3天内同步进行流式肽质奥义验证。(a-d)与CD4+应该答者相对应该的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应该答者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。用作阳性对照(抑制的叛离该肽质仅有treg)算成抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 畸变CD4+T肽质对减太快成效的T肽质再造的抑制作用更敏感。SP小组用金色的新线和白点暗示，HD小组用金色的新线和白点暗示，绿色的新线/白点暗示丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肽质同步进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被cfsel标有，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再造肽质，培育3天内同步进行流式肽质奥义(CD25反染)和肽质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应该答者携手培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育当中的表达成来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得成的正确性是，来自减太快成效子的再造知觉CD4+Treg在GITR表达成来当中赢取了延展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1M-冠心病风险群纤当中的异质性的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28